Comment lire les bandes d'électrophorèse sur gel?

Si vous effectuez vous-même le test d'électrophorèse sur gel, soyez prudent si vous travaillez avec un gel dangereux.

L'électrophorèse sur gel est un type de biotechnologie qui sépare les molécules en fonction de leur taille pour interpréter l'ADN d'un organisme. Une enzyme est utilisée pour séparer un brin d'ADN d'une source et l'ADN est mis en suspension dans un colorant. Ensuite, le colorant est appliqué sur un gel chargé négativement sur un côté d'une feuille. L'ADN se déplace automatiquement à travers un ensemble de bandes horizontales sur la feuille pour atteindre le gel chargé positivement de l'autre côté. L'électrophorèse sur gel est utile pour déterminer la parenté entre deux espèces ou plus ou des spécimens individuels. Il peut également aider à établir une empreinte ADN.

Méthode 1 sur 3: visualisation de vos échantillons

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Tenez une lampe UV jusqu'à la feuille de gel pour révéler les résultats. Avec votre feuille de gel devant vous, trouvez l'interrupteur sur un tube de lumière UV pour l'allumer. Tenez la lumière UV à 8-41 centimètres (20-41 cm) de la feuille de gel. illuminez les échantillons d'ADN avec la lumière UV pour activer le gel et lire les résultats. Si le test a été effectué correctement, votre feuille devrait avoir 2 à 8 jeux de bandes verticales en rangées parallèles.
- Les bandes individuelles indiquent des brins spécifiques d'ADN. Les bandes doivent avoir des niveaux d'épaisseur variables.
- Si vous lisez des résultats qui ont été imprimés sur une feuille de papier, vous pouvez ignorer cette étape.
Avertissement: Portez des gants et des lunettes de protection lors de la manipulation physique d'un échantillon de gel. Toucher le gel peut interférer avec vos résultats et certains gels sont nocifs s'ils pénètrent dans vos yeux. Placez la feuille de gel sur un morceau de papier ciré si vous la retirez de la machine.
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Trouvez les puits en recherchant les plus grands bassins de couleur. Pour vous orienter correctement, vous devez trouver l'emplacement d'origine des échantillons, appelé puits. Avec votre drap devant vous, cherchez le bout du drap avec une grande flaque de gel coloré. Les puits sont les emplacements où les échantillons de gel sont chargés dans la feuille et indiquent le début de l'échantillon.
- Il devrait y avoir un puits pour chacun de vos échantillons. Si l'un des puits manque de couleur, l'échantillon peut avoir été mal appliqué.
- Les puits indiquent l'extrémité négative de la feuille. Le côté opposé de la feuille est l'extrémité positive. Lorsque chaque échantillon est appliqué sur la feuille, l'ADN chargé négativement traverse la feuille jusqu'au côté opposé, laissant derrière lui des échantillons individuels d'ADN lorsqu'il se déplace..
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Classer chaque bande en notant l'origine des échantillons. Si vous avez reçu une clé, sachez que chaque rangée horizontale représente un ensemble unique d'ADN. Utilisez votre clé pour déterminer ce que chaque ligne représente. Le nombre d'échantillons peut être déterminé en comptant le nombre de lignes. Si vous n'avez pas reçu de clé, vous ne pouvez pas déterminer la source de chaque échantillon. L'électrophorèse ne vous fournit que des informations sur le comportement d'un échantillon d'ADN, mais elle ne révèle pas la source d'un échantillon à elle seule.
- Si vous avez effectué le test vous-même, notez d'où provient l'échantillon de chaque rangée pendant que vous appliquez le gel.
Illuminez les échantillons d'ADN avec la lumière UV pour activer le gel et lire les résultats.
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Identifiez l'échelle d'ADN pour établir une échelle pour l'ADN. Selon qu'une échelle d'ADN a été incluse ou non dans le test, vous pouvez avoir une bandelette conçue pour vous fournir une échelle pour faciliter les comparaisons. Cette échelle s'appelle l'échelle d'ADN. L'échelle d'ADN contiendra des bandes d'ADN de tailles connues pour faciliter la détermination de la taille ou de la petite taille des autres bandes.
- Les échantillons d'ADN réels auront beaucoup de variation dans la séquence des bandes. Il peut y avoir quelques bandes fines, suivies de 1 à 5 centimètres (2,5 à 5,1 cm) d'espace vide, suivies de bandes épaisses et se terminant par des bandes plus fines. L'échelle d'ADN permettra de déterminer plus facilement la taille réelle des bandes individuelles en vous donnant quelque chose à quoi les comparer.
- L'échelle d'ADN est presque toujours placée dans la dernière rangée en haut ou en bas de votre feuille.

Méthode 2 sur 3: évaluation de la taille des échantillons

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Identifiez des bandes plus fines pour trouver les molécules d'ADN les plus rapides. Lorsque chaque échantillon est appliqué, il commence à se déplacer vers l'extrémité positive de la feuille à droite. Plus les molécules sont petites, plus elles se déplacent rapidement car elles subissent moins de résistance. Un échantillon d'ADN plus petit et plus rapide laisse des bandes plus fines lorsqu'il se déplace. Lorsque vous examinez vos résultats, déterminez quels échantillons d'ADN sont plus petits et plus rapides en recherchant les bandes les plus fines.
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Trouvez les bandes les plus épaisses pour trouver l'ADN le plus lent. Les échantillons avec des molécules plus grosses se déplacent naturellement plus lentement à travers le gel. En conséquence, vous pouvez trouver les molécules plus grosses ou plus lentes en recherchant les plus grandes bandes sur votre page. En regardant la fréquence des bandes plus grandes et plus petites telles qu'elles apparaissent dans une seule rangée, vous obtenez une bonne image de l'empreinte ADN de l'échantillon.
- La façon dont les bandes individuelles sont disposées dans une séquence est unique à chaque échantillon génétique. La combinaison de bandes fines et épaisses crée une image spécifique de la constitution génétique d'une personne.
- L'ADN n'est pas plus fort ou meilleur s'il laisse des bandes plus épaisses. Ces bandes sont simplement des marqueurs d'identification que vous pouvez utiliser pour comparer une variété d'échantillons.
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Utilisez l'échelle d'ADN pour déterminer la taille de chaque bande. L'échelle d'ADN est utilisée pour vous donner une échelle à laquelle comparer les bandes individuelles. La taille des bandes dans une échelle d'ADN dépend du type d'échelle qui a été utilisé pour le test, mais elle sera généralement de 10 à 100 pb (paires de bases) ou de 500 à 1000 pb. La bande la plus épaisse est la plus grande taille dans un spectre et la plus petite taille est la plus basse. Ainsi, pour une échelle de 10 à 100 pb, la bande la plus épaisse est de 100 pb et la bande la plus mince est de 10 pb.
- 1000 pb équivaut à 1 ko. Kb est l'abréviation de kilo-base, et l'échelle peut utiliser cette unité au lieu de bp. Plus l'échelle est petite, plus les comparaisons seront précises.
- Les paires de bases et les kilo-bases sont simplement des unités de mesure. Ils font référence à la taille physique d'une molécule d'ADN.
Astuce: La portée d'une échelle ADN est imprimée sur la bouteille dans laquelle l'échelle est entrée. Elle peut également être indiquée sur la clé si vous en avez reçu une. Il n'y a aucun moyen de déterminer la plage d'une échelle basée sur la bande seule, car différents gels permettront aux échantillons de se déplacer à différentes vitesses.

Les puits sont les emplacements où les échantillons de gel sont chargés dans la feuille et indiquent le début de l'échantillon.

Méthode 3 sur 3: tirer des conclusions

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Recherchez les bandes qui apparaissent au même endroit sur la feuille pour trouver des similitudes. Lorsque vous examinez la feuille de manière globale, recherchez les points où 2 bandes ou plus apparaissent à des emplacements identiques sur des lignes différentes. C'est un indicateur que les échantillons d'ADN sont en quelque sorte liés. S'il y a 2 lignes ou plus sans aucun chevauchement dans la séquence, elles sont totalement indépendantes. Plus les 2 échantillons sont liés, plus il y aura de chevauchement dans leurs séquences.
- Autrement dit, si vous regardez la feuille avec les puits à gauche, vous recherchez des colonnes verticales où 2 bandes apparaissent en même temps.
- Par exemple, une mère et son enfant auront la moitié de leurs bandes qui se chevauchent. Un enfant et ses cousins germains peuvent cependant n'avoir que 2-3 bandes qui se chevauchent.
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Identifiez des échantillons identiques en trouvant des bandelettes avec la même configuration. Si 2 échantillons ou plus ont une séquence de bandes presque identique, il s'agit du même ADN. Cela ne signifie pas nécessairement que la source de l'échantillon est les mêmes jumeaux identiques, par exemple, auront la même séquence d'ADN sur une feuille d'électrophorèse. Des bandes identiques sont généralement nécessaires pour relier raisonnablement un suspect à une scène de crime.

Astuce: L'électrophorèse est souvent utilisée par les équipes médico-légales pour écarter des suspects dans des affaires pénales. Il est également utilisé pour tester la maternité ou la paternité.
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Comprendre les limites des tests d'électrophorèse. Les tests d'électrophorèse sont utiles lorsqu'il s'agit de comparer des échantillons d'ADN, mais il peut parfois être difficile de tirer des conclusions définitives. L'échelle ne peut qu'être agrandie et le maculage peut rendre les bandes difficiles à interpréter. Dans certains cas, vous ne pourrez pas dire de manière concluante que 2 échantillons sont liés.
- Plus de 2 bandes qui se chevauchent indique une forte similitude entre 2 échantillons. Lors de l'évaluation des résultats, les scientifiques diront souvent qu'il existe une «haute probabilité» que 2 échantillons soient liés si moins de la moitié des bandes de 2 échantillons se chevauchent.

L'ADN se déplace automatiquement à travers un ensemble de bandes horizontales sur la feuille pour atteindre le gel chargé positivement de l'autre côté.

Conseils

Vous ne pouvez utiliser que l'électrophorèse sur gel pour tirer des conclusions comparatives. Une seule bande ne vous dira rien.

Mises en garde

Si vous effectuez vous-même le test d'électrophorèse sur gel, soyez prudent si vous travaillez avec un gel dangereux. Certains gels contiennent des ingrédients toxiques. Portez un masque anti-poussière et des gants en caoutchouc lorsque vous travaillez avec des produits chimiques dangereux.

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