Comment faire un gel d'électrophorèse?
Procurez-vous un plateau de coulée de gel d'électrophorèse.
L'électrophorèse est le terme utilisé pour l'étude de la façon dont les particules chargées se déplacent à travers un milieu lorsqu'elles sont soumises à un champ électrique. Les particules traverseront le gel à des vitesses différentes, en fonction de la charge portée par la particule et de la taille de la particule qui doit traverser le milieu quelque peu restrictif. Le milieu est volontairement rendu restrictif de sorte que les particules forment un motif dans le milieu qui peut être analysé lorsque le champ électrique est supprimé. Cette technique est précieuse dans la recherche médicale pour séparer l'ARN, l'ADN et les protéines en fonction de leurs capacités à se déplacer à travers le gel. Utilisez ces conseils pour apprendre à fabriquer un gel d'électrophorèse.
- 1Trouvez la concentration de gel requise. Cela doit être spécifié par le médecin et variera en fonction du type de test requis par l'étude que le médecin effectue. Les concentrations courantes sont de 0,7 pour cent. 0,8 pour cent, 1,0 pour cent et 1,2 pour cent.
- 2Procurez-vous un plateau de coulée de gel d'électrophorèse. Ces plateaux sont disponibles dans les points de vente de fournitures médicales. Notez le volume du plateau car il déterminera la quantité maximale de gel d'électrophorèse qui peut être faite à la fois.
- 3Rassemblez les produits chimiques nécessaires. Obtenez une quantité de Tris-Acetate-EDTA (TAE) suffisante pour compenser le volume du gel en cours de fabrication. La quantité d'agarose, le polymère qui forme le gel, dépendra de la concentration du gel à fabriquer. Le pourcentage de gel exprimé est l'agarose en grammes divisé par le TAE en ml. Le dernier ingrédient nécessaire est le bromure d'éthidium (EtBr). EtBr rend l'ADN visible sous la lumière ultraviolette. Divisez la quantité de TAE utilisée par 1000 pour déterminer la quantité d'EtBr nécessaire.
- 4Ajouter l'agarose. Ajouter la quantité déterminée d'agarose à la quantité requise de TAE. Remuez ou remuez doucement le mélange pour assurer un bon mélange.
- 5Préparez le mélange. L'agarose dans le TAE doit être chauffé dans un four à micro-ondes pour le dissoudre. Réchauffez la solution pendant de courtes périodes, par exemple 15 secondes, à faible puissance. Vérifiez constamment l'avancement de la fonte. Si le TAE est réchauffé au point où des particules se forment, le lot a été détruit.
Le tampon permet à un courant électrique de traverser tout le système, ce qui permet l'électrophorèse sur gel. - 6Ajoutez l'etbr. EtBr est peut-être mutagène. Portez des gants et des lunettes de laboratoire et retirez tout ce dont vous n'aurez pas besoin de la zone où vous préparez le gel pour éviter la contamination. Ajouter l'EtBr une fois le chauffage du TAE terminé. Remuez ou remuez doucement le récipient pour assurer un bon mélange. Laisser le liquide reposer et refroidir pendant 5 minutes.
- 7Remplissez les plateaux de coulée. Agiter ou remuer le mélange chimique pour s'assurer qu'il y a une température uniforme dans tout le mélange. Versez soigneusement le mélange dans le bac de coulée.
- Assurez-vous qu'il n'y a pas de bulles dans le gel, car elles interfèrent avec le processus d'électrophorèse. Si vous voyez des bulles, utilisez une pointe de pipette pour les faire éclater ou déplacez-les sur le côté du plateau.
- 8Insérez les peignes. Placez les peignes de coulée dans les rails de support du plateau de coulée. Les dents du peigne vont créer des puits dans le gel auxquels l'échantillon à tester peut être ajouté. Les peignes sont disponibles en différentes tailles pour créer des puits de différentes tailles. La taille des puits à former sera déterminée par le médecin en fonction de l'étude à réaliser.
- 9Laisser les plateaux de coulée refroidir et le gel reposer pendant 1 heure. Retirez les peignes de coulée. Retirez le gel du plateau de coulée. Le gel d'électrophorèse est maintenant prêt à l'emploi.
- Le bromure d'éthidium (EtBr) est un puissant mutagène. Évitez de le mettre n'importe où sur la peau. Évitez de le répandre autour de la zone de travail.
- Le TAE sera chaud en provenance du micro-ondes. Le conteneur de TAE liquide doit être manipulé avec précaution.
- Tris-acétate-EDTA (TAE)
- Agarose
- Bromure d'éthidium (EtBr)
- Plateau de coulée de gel d'électrophorèse
- Gants de sécurité de laboratoire
- Four micro-onde
Lisez aussi: Comment écrire une fanfiction parodique?
Questions et réponses
- Quand est-ce que je mets l'ADN?Lorsque vous faites le gel, vous devez y insérer un peigne. Ces peignes forment de petits puits d'un côté du gel. C'est là que vous micropipettez votre matériel génétique.
- Pourquoi faut-il ajouter du tampon?Le tampon permet à un courant électrique de traverser tout le système, ce qui permet l'électrophorèse sur gel. Le courant électrique traverse le tampon, et puisque le gel est entouré par le tampon, le courant traverse également le gel.
