Comment faire de la gélose trypticase soja (TSA)?
Placer le ballon sur la plaque d'agitation chaude, tourner la plaque à température élevée et porter à ébullition.
La Tryptic Soy Agar (TSA) est un milieu complexe; il est utilisé pour cultiver des micro-organismes exigeants ou non exigeants.
- Agar: Un polysaccharide sulfaté utilisé comme agent épaississant.
- Autoclave: est une chambre remplie de vapeur sous pression. Le but de l'autoclavage est de stériliser les liquides et certains solides. Il utilise la chaleur humide principalement parce qu'il tue les bactéries plus rapidement que la chaleur sèche.
- Tampon: Une solution avec un pH extrêmement stable.
- Milieu complexe: est un milieu riche en acides aminés riches et en vitamines qui favorisent la croissance microbienne, le TSB est un exemple de milieu complexe.
- Cultiver/culture: Le processus de croissance de micro-organismes.
- fastidieux: est un organisme qui a besoin d'un environnement riche en nutriments pour se cultiver.
- Média/milieu: Un gel liquide ou solide utilisé pour cultiver des micro-organismes
- Bouillon trypticase soja (TSB): le TSB est riche en acides aminés, en vitamines et contient plusieurs substrats pour la croissance microbienne tels que le digestat enzymatique de la caséine, le chlorure de sodium pour l'équilibre osmotique, le phosphate dipotassique qui sert d'agent tampon pour maintenir le pH, le digestat papaïque de tourteau de soja et eau.
- Gélose
- Bouillon Trypticase Soja (TSB)
- Fiole Erlenmeyer de 1 L - Le récipient doit être deux fois le volume du liquide à autoclaver.
- Bouchon en métal pour l'Erlenmeyer
- Grand barreau magnétique
- Plaque d'agitation chaude
- 500 ml d'eau distillée
- Bateau de pesée en plastique propre
- Solde de chargement par le haut
- Cylindre gradué
- Coussin chauffant ou gant
- Tige à pointe magnétique longue en téflon
- Autoclave
- Ruban autoclave
- Enregistrer
- Marqueur
- Minuteur
Replacez le capuchon métallique sur le flacon et replacez le flacon sur la plaque d'agitation chaude.
- 1À l'aide du marqueur et du ruban adhésif, étiquetez le flacon avec votre nom, la date et le nom de la solution (TSA).
- 2Faites glisser avec précaution le grand barreau magnétique dans l'erlenmeyer.
- 3Mesurer 500 ml d'eau distillée avec l'éprouvette graduée.
- 4Verser 500 ml d'eau distillée de l'éprouvette graduée dans l'erlenmeyer.
- 5Placer le capuchon métallique sur le flacon.
- 6Placer le ballon sur la plaque d'agitation chaude, tourner la plaque à température élevée et porter à ébullition.
- 7Placez la nacelle de pesée en plastique propre sur la balance à chargement par le haut et tarez (zéro).
- 8Peser environ 6 grammes d'agar.
- 9Avec votre gant chaud, retirez le flacon de la plaque d'agitation chaude et versez de la gélose dans le flacon.
- 10Replacez le capuchon métallique sur le flacon et replacez le flacon sur la plaque d'agitation chaude.
- 11Activez la sélection de la plaque d'agitation et commencez à mélanger à vitesse moyenne, puis augmentez progressivement la vitesse de mélange à moyen-élevé sur une période d'une minute. Continuer à feu vif et à une vitesse d'agitation moyennement élevée jusqu'à ce que toute la gélose soit dissoute, environ 15 minutes.
- 12Placez la nacelle de pesée en plastique propre sur la balance à chargement par le haut et tarez (zéro).
- 13Pesez environ 15 grammes de TSB.
- 14Avec votre gant chaud, retirez le flacon de la plaque d'agitation chaude et versez le TSB dans le flacon.
- 15Remettez le capuchon métallique sur le ballon et continuez à chauffer la solution à température élevée et à un taux d'agitation moyen-élevé jusqu'à ce qu'elle ne soit plus trouble. (Astuce: pour déterminer si la solution est prête, prenez-la avec votre gant chaud et tenez le flacon à la lumière. Si vous voyez des cristaux, la solution n'est pas prête.)
- 16Lorsque la solution de TSA est claire, retirez-la de la plaque d'agitation chaude à l'aide de votre gant chaud et placez-la sur une surface propre qui ne reçoit pas beaucoup d'air.
- 17Éteignez la plaque d'agitation chaude.
- 18Utilisez la longue tige de pointe magnétique en téflon pour retirer la barre d'agitation dans le ballon. Cela peut être fait en plaçant la tige dans le ballon et en touchant la barre d'agitation.
- 19Couvrir le flacon avec le capuchon métallique.
- 20Couper une bande de ruban autoclave d'environ 8 centimètres (7,6 cm) de long et placer le ruban verticalement sur le côté du capuchon métallique jusqu'au flacon. Le ruban doit maintenir le bouchon et le flacon ensemble.
- 21Apportez votre solution à l'autoclave et suivez les instructions d'autoclavage.
Avec votre gant chaud, retirez le flacon de la plaque d'agitation chaude et versez de la gélose dans le flacon.
- Une solution de 500 ml de TSA donne environ 10 à 15 plaques.
- Les proportions d'ingrédients peuvent varier en fonction de la fabrication du produit.
- Respectez la date de péremption sur les contenants du TSB et de la gélose.
- La TSA est de couleur jaune-ambre.
- La TSA est un irritant pour les yeux, la peau et le système respiratoire. Utiliser avec précaution.
- Ne laissez pas le bouillon TSA sur la plaque d'agitation chaude sans surveillance.
- Suivez le protocole de stockage sur les conteneurs de TSB et de gélose.
- Suivez le protocole d'élimination approprié sur les conteneurs de TSB et de gélose.
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